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公司新闻/正文
ibidi 3D 细胞培养微插件玩转指南
285 人阅读发布时间：2025-01-07 16:40
前言
ibidi 3D 细胞培养微插件（Micro-Insert 3D, ibidi 80496 或 80499）是一种生物相容性硅胶插件，适用于在基质胶表面上或基质胶内部创建细胞界面。其应用包括共培养、转运研究、顶端-基底细胞极性测定以及其他基于水基基质胶的细胞实验。
图 1：ibidi 3D 细胞培养微插件（Micro-Insert 3D, ibidi 80496 或 80499）。材料
ibidi 3D 细胞培养微插件是由生物相容性硅胶制成的。尽管该材料可以高压蒸汽灭菌，并且与酒精兼容，但不建议重复使用。
请注意！在使用 ibidi µ-Dish 培养皿、µ-Slide 载玻片或 µ-Plate 培养板时，请确保 ibidi 聚合物盖玻片与所使用的镜油兼容。与本品兼容的镜油品类的列表请参阅「与本品兼容的镜油品类」一节。
运输与储存
ibidi 3D 细胞培养微插件均经过灭菌处理，并使用透气包装进行密封。在适当的储存条件（干燥处，避免阳光直射）下，其保质期如下所示：
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运输/储存条件：室温（15~25°C）
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保质期：36 个月
规格尺寸
请注意！本品不含基质胶，实验者需另购。
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微插件直径：12 mm
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微插件高度：6 mm
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内孔直径：3 mm
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内孔容积：25 μL
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外孔容积：250 μL
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基质胶体积：20 μL
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基质胶高度：0.8 mm
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基质胶表面细胞生长面积：0.07 cm^2
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材料：生物相容性硅胶
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底部材料（ibidi，80496）：ibidi 聚合物盖玻片（ibidi μ-Dish 35 mm 高壁培养皿，经 ibiTreat 处理）
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底部材料（ibidi，80499）：无底部，需与适当基底材料配合使用
图 2：ibidi 3D 细胞培养微插件规格尺寸示意图。
兼容表面
ibidi 3D 细胞培养微插件可转移至任意平整、洁净且干燥的表面使用。在转移过程中，建议使用无菌镊子进行操作，并轻柔地将 ibidi 3D 细胞培养微插件按压至预定位置。需注意的是，ibidi 3D 细胞培养微插件的粘性仅限于其底部。此外，ibidi 3D 细胞培养微插件不适用于潮湿、不平整或存在灰尘的表面。
请注意！放置 ibidi 3D 细胞培养微插件后，须检查其是否已紧密粘附于所在表面上；若否，则需用无菌镊子轻压以使其粘附牢固。
ibidi 建议在 ibidi µ-Dish 培养皿、µ-Slide 2 孔腔室载玻片、6 孔或 12 孔培养板或大型培养皿中使用 ibidi 3D 细胞培养微插件。此外，ibidi 3D 细胞培养微插件亦可在无菌的玻璃盖玻片或玻璃载玻片上使用。
基质胶制备及细胞接种
本节详细叙述了在基质胶表面上接种细胞的标准操作流程。实验者可以多种方式对该流程进行变更，如将细胞包埋于基质胶中或将细胞接种至插件外孔中。有关变更标准操作流程的更多详细信息，请参阅下文「操作流程之变更」一节。
图 3：细胞接种标准操作流程示意图。
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根据制造商的操作指南或相关参考文献制备基质胶；
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如图 4 所示，在插件内孔中加入 20 μL 液态基质胶——吸液时，须避免产生气泡；加液时，移液器吸头尖端须伸至内孔的中央位置，避免触及孔壁；
图 4：在插件内孔中加入基质胶。
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根据制造商的操作指南中的相关指引，令液态基质胶凝胶化；
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调整基质胶体积（相关操作详见「调整基质胶体积」一节）；
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如图 5 所示，在插件外孔中加入 250 μL 培养基——在加入培养基前，须确认基质胶已完全凝胶化；若 250 μL 培养基无法均匀覆盖外孔底部，则可采用分次加入法，即从外孔相对的两侧各注入 125 μL 培养基；
图 5：在插件外孔中加入细胞培养基。
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按常规方法用胰蛋白酶处理细胞并进行计数，随后将细胞悬液稀释至所需浓度；一般而言，采用 2~5×10^5 cells/mL 细胞悬液进行接种，在细胞贴壁后，可在基质胶表面上形成 100% 光学汇合层；
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在插件内孔中加入 25 μL 上述细胞悬液，加液时移液器吸头尖端切勿触及基质胶；
图 6：在插件内孔中加入细胞悬液。
- 按常规方法进行培养，并镜检监测细胞贴壁情况；
图 7：培养并镜检监测细胞贴壁情况。-
继续进行实验。
请注意！上文所述插件内孔及外孔中的加液体积为推荐值。如有需要，实验者可变更加液体积以达到特定科研目的（例如令插件内孔及外孔的液面高度不同）。
操作流程之变更
本节叙述了对上述标准操作流程的变更方法。
α. 将细胞包埋于基质胶中
如需在基质胶中加入细胞，请采用细胞密度为 5~11×10^4 cells/mL 的基质胶-细胞混合液进行细胞接种。
图 8：将细胞包埋于基质胶中。
β. 在插件外孔中接种细胞
如需在插件外孔中接种细胞，请采用细胞密度为 5~11×10^4 cells/mL 的细胞悬液进行细胞接种。
图 9：在插件外孔中接种细胞。
调整基质胶体积
若插件内孔中准确填充了 20 μL 基质胶，则会形成一个平整的基质胶表层，用以支撑均匀的细胞层，并利于显微镜观察。然而，受基质胶粘度、移液器吸头尖端残留基质胶以及常规移液操作误差的影响，实际进入插件内孔的体积可能与移液器设定的移液体积存在差异。由此，实验者可用毫米方格纸（如图 10 所示）来评估基质胶表面的平整度。
图 10：毫米方格纸。
基质胶凝胶化后，实验者可将微插件至于距毫米方格纸 1~2 cm 的位置。透过基质胶层观察纸上的网格。若观察到网格放大或缩小，则以每次 ±1 μL 的步长调整基质胶体积。
图 11：网格未放大或缩小，说明插件内孔中基质胶体积恰为 20 μL。
若方格纸的网格缩小，则需适当增加移液体积；若网格放大，则需适当减小移液体积（如图 12 所示）。
图 12：网格放大，说明插件内孔中基质胶体积偏大，需适当减小移液体积。请注意！由于环境条件的影响，水基基质胶的体积可能会因蒸发、膨胀或收缩而发生变化。
化学相容性
以下列表提供了本品化学兼容性和溶剂兼容性的基本信息。
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甲醇——相容
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乙醇——相容
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甲醛（福尔马林）——相容
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丙酮——不相容
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矿物油——相容
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硅油——相容
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镜油——详见「与本品兼容的镜油品类」一节
与本品兼容的镜油品类
当将 ibidi 聚合物盖玻片与油镜配合使用时，请仅使用下表中指定的镜油。使用任何非推荐镜油均可能损坏 ibidi 聚合物盖玻片。由此导致的漏液可能会损坏物镜和显微镜部件。所有未在下表中列出的镜油都应视为不兼容。
