ibidi μ-Pattern 细胞微区块培养初探

2）具有 Bioinert 生物惰性涂层的 ibidi 产品

图 4

3）μ-Pattern 微区块

下图展示了共价结合于生物惰性表面上的 RGD 细胞黏附位点，其本质是基于细胞外基质蛋白纤连蛋白（Fibronectin）的黏附基序。无论是用相差显微镜还是荧光显微镜进行镜检，这些 RGD 微区块在视野中均不可见。

 

图 5

 

如图 6 所示，ibidi μ-Pattern 可提供多种样式的微区块（如单细胞阵列、多细胞阵列等），还可提供微区块定制：

 

图 6

 

特色与优势

1）产品优势

ibidi μ-Pattern 具有以下优势：

• 标准化；
• 易于量化；
• 长期稳定；
• 即取即用；
• 适用于所有细胞系；
• 包被简便；
• 光学性质优良；
• 适用于高分辨率成像。

2）RGD 微区块 vs ibiTreat 微区块

以下是 ibiTreat 微区块与 RGD 微区块的各方面优势比较一览表：

 

 表 1

ibiTreat 微区块在相差显微镜下略微可见，因为生物惰性涂层会产生微小的相位偏移，这种偏移在相差显微镜下时会显现出来，如图 7 所示：

图 7

3）改进之处

• 在 ibiTreat 或细胞外基质涂层上直接细胞生长提供了广泛的贴壁可能性；
• 微区块在相差显微镜下略微可见，为检查细胞贴壁情况、调整实验方案提供了方便。

实验流程

1）实验材料

• A549（人肺癌）
• NIH-3T3（小鼠成纤维细胞）
• BEAS-2B（人肺上皮细胞）
• CHO（中国仓鼠卵巢细胞）
• NCI-H441（人肺腺癌细胞）
• HEK-293（人胚胎肾细胞）
• HeLa（人子宫颈癌细胞）
• HT-1080（人纤维肉瘤细胞）
• HuH-7（人肝癌细胞）
• L929（小鼠成纤维细胞）
• MCF-10A（人乳腺上皮细胞）
• MDA-MB-231（人乳腺癌细胞）
• MDA-MB-436（人乳腺癌细胞）
• MDCK.2（犬肾细胞）
• RCC-26（人肾癌细胞）
• ARPE-19（人视网膜色素上皮细胞）
• ……

2）实验步骤

• 将细胞悬液接种至载玻片的各个孔或通道中；
• 盖上随附的盖子，在细胞培养中以 37°C、5% 二氧化碳条件下孵育细胞；
• 等待细胞贴壁；
• （可选步骤）用无细胞培养基涤去未贴壁细胞；
• 继续实验。

图 8

• 包被 μ-Patterns；
• 将细胞悬液接种至载玻片的各个孔或通道中；
• 盖上随附的盖子，在细胞培养中以 37°C、5% 二氧化碳条件下孵育细胞；
• 等待细胞贴壁；
• （可选步骤）用无细胞培养基涤去未贴壁细胞；
• 继续实验。

图 9

实验示例

• 细胞球状体培养：在镜检前固定细胞球状体，以便于观察；
• 2D 细胞单层培养：以特定的模式接种细胞；
• 其它高级应用：细胞极性和分化、药物筛选和测试、细胞迁移研究、癌细胞行为研究与 CART 细胞分析。

1）细胞球状体培养

如图 10 所示，在 μ-Slide VI 0.4 通道载玻片中，已于静态条件下培养 23 d 的 L929 细胞在 ibiTreat µ-Pattern 微区块上形成了细胞球状体。细胞直接接种于 ibiTreat µ-Pattern 微区块（无额外涂层）或额外以层粘连蛋白（Laminin）或胶原蛋白 I（Collagen I）包被的 ibiTreat µ-Pattern 微区块上。从第1 d（左）至第 23 d（右），使用相差显微镜 4×物镜成像，以观察细胞球状体的形成。比例尺长度为 200 µm。

 

 

 图 10

2）2D 细胞培养

在 μ-Slide VI 0.4 通道载玻片中的 ibiTreat µ-Pattern 微区块上，L929 细胞形成了细胞单层。接种 25 h 后，用相差显微镜的 4× 物镜成像（左图）以及对单个细胞黏附位点的特写（右图）。比例尺长度为200 µm。

图 11

 

3）细胞杀伤实验

在包被有胶原蛋白 I（Collagen I）的多细胞 μ-Pattern ibiTreat 微区块上生长的 RCC26（肾细胞癌）细胞的杀伤实验：添加 T 细胞前（A），添加 T 细胞后 40 min（B）、7 h 40 min（C）以及 47 h 40 min（D）。

图 12