细胞培养新视野：细胞灌流培养与活细胞成像全攻略

活细胞成像技术以其实时监测、定量分析、高分辨率成像、无损伤性、接近生理环境和广泛适用性等优点，在生命科学研究领域发挥着重要作用。同时，活细胞成像亦是细胞灌流培养过程中一种可靠的监测手段。

根据实验所需的持续时间和温度条件，存在多种实验设计方案，每种方案都有其独特的优势和局限性。本应用指南旨在详细阐述和探讨这些不同的实验设计方案，以便为科研人员提供科学、严谨的参考依据。

1）载物台上孵育法

α. 材料

• 置于显微镜旁的 ibidi 流体剪切力系统
• ibidi 活细胞培养箱（含载物台上的活细胞培养箱、气体混合器和温控）——可控制载物台培养室中的温度、二氧化碳和湿度
• 倒置显微镜

β. 优点

• 细胞处于加温环境中；
• 成本低廉。

γ. 缺点

• 灌流管内的温度梯度可能促进气泡的产生；
• 因为培养基在载物台活细胞培养箱（可提供二氧化碳）中的暴露时间很短，培养基的二氧化碳摄取量较低；
• 在长期实验过程中不稳定。

δ. 适用范围

• 短期实验

2）载物台-台式培养箱联合孵育法

α. 材料

• 置于显微镜旁的 ibidi 流体剪切力系统
• 台式培养箱
• ibidi 活细胞培养箱（含载物台上的活细胞培养箱、气体混合器和温控）——可控制载物台培养室中的温度、二氧化碳和湿度
• 倒置显微镜

β. 优点

• 细胞处于37°C 恒温环境中，因为培养基仅在台式培养箱通往载物台培养室的管路中发生冷却；
• 培养基所摄取的二氧化碳供给培养基储液器和通道载玻片——为使二氧化碳供给最优，流体泵后部端口必须与台式培养箱的内部气体环境相连接；
• 在中等时间范围内保持稳定。

γ. 缺点

• 灌流管内的温度梯度可能促进气泡的产生。

δ. 适用范围

• 需要持续对细胞加温的中等时长实验；
• 可在实验装置中引入气泡捕集器，从而使该装置适用于时长更长的实验。